2 × суміш ПЛР Taq

Ультрачиста та ефективна ДНК-полімераза Taq.

Taq ДНК -полімераза - це рекомбінантний білок з молекулярною масою 94 кДа, який був індукований та експресований з кишкової палички, клонованої геном ДНК -полімерази Thermo aquatica, а потім очищений та розділений за допомогою трьох етапів очищення колонки. Фермент має хорошу стабільність і сильну специфічність, без екзогенної нуклеази та бактеріального забруднення ДНК, і підходить для звичайної ампліфікації ПЛР.

Однотрубний Taq MasterMix (Національна сертифікація високотехнологічної продукції)

■ Taq MasterMix покращив специфічність і чутливість реакції ПЛР і може посилювати складні шаблони з високим вмістом ГХ, вторинною структурою тощо. Можна збільшити всього 2 копії цільового шаблону, що забезпечує більш точні результати експерименту.

■ Унікальна формула Taq MasterMix робить всю реакційну систему дуже стабільною, і на активність не впливатиме повторне заморожування-розморожування або тривале зберігання при 4 ° C.

■ Стабільний та ефективний попередньо приготований змішаний розчин ПЛР може зробити операцію швидкою та простою, значно зменшуючи трудомісткість та помилку вибірки. Високопродуктивний підсилювач та оптимізатор ПЛР також входять до складу суміші, що зменшує вимоги до умов ПЛР.

■ Цей продукт має як системи, що містять барвник, так і без барвників. Продукти MasterMix, що містять барвник, можуть бути безпосередньо піддані електрофорезі після ПЛР, без завантажувального буфера.

Кіт Немає Розмір упаковки
4992229 1 мл
4992230 5*1 мл
4992255 1 мл
4992256 5 × 1 мл

Деталі продукту

Експериментальний приклад

FAQ

Теги продукту

Визначення діяльності

Активність 1 одиниці (U) Taq ДНК-полімерази визначається як кількість ферменту, необхідного для включення 10 нмоль дезоксинуклеотидів у кислотонерозчинні речовини при 74 ℃ протягом 30 хв, використовуючи активовану ДНК сперми лосося як матрицю/праймер.

Контроль якості

Чистота шляхом виявлення SDS-PAGE становить більше 99%; Активність екзогенної нуклеази не виявляється; Однокопійний ген у геномі людини можна ефективно ампліфікувати; При зберіганні при кімнатній температурі протягом одного тижня істотна зміна активності не змінюється.

Основні технічні параметри

Фермент має 5′-3 ′ полімеразну активність і 5′-3 ′ екзонуклеазну активність, і без 3′-5 ′ екзонуклеазної активності. Швидкість розширення полімеризації ДНК становить 1-2 кб/хв при 70-75 ℃. Продукт ПЛР має 3'-дА звиси, які можна безпосередньо клонувати у векторі клонування ТА.

Додатки

Як правило, він використовується для ампліфікації, розширення праймера, секвенування та А-хвоста на тупому кінці ДНК розміром <6 кб і має низькі вимоги до вірності.

Усі продукти можна налаштувати для ODM/OEM. Для деталей,будь ласка, натисніть Індивідуальне обслуговування (ODM/OEM)


  • Попередній:
  • Далі:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Використання геномної ДНК людини як шаблону для ампліфікації фрагмента розміром 1 кб
    Experimental Example Після реакції ПЛР візьміть 5 мкл для виявлення електрофорезу.
    З: Немає смуг посилення

    Шаблон А-1

    ■ Шаблон містить білкові домішки або інгібітори Taq тощо. - Очистіть матрицю ДНК, видаліть білкові домішки або витягніть матричну ДНК за допомогою наборів для очищення.

    ■ Денатурація шаблону не завершена - - належним чином збільшіть температуру денатурації та подовжте час денатурації.

    ■ Деградація шаблону-повторно підготуйте шаблон.

    Буквар А-2

    ■ Погана якість грунтовки-повторно синтезуйте грунтовку.

    ■ Деградація грунтовки —— Розріжте грунтовки з високою концентрацією на невеликий об’єм для збереження. Уникайте багаторазового заморожування та розморожування або тривалого кріоконсервування при 4 ° C.

    ■ Неправильна конструкція грунтовки (наприклад, довжина ґрунтовки недостатня, димер утворений між праймерами тощо)

    А-3 мг2+концентрація

    ■ Mg2+ концентрація занадто низька —— Правильно збільшити Mg2+ концентрація: Оптимізуйте Mg2+ концентрації шляхом серії реакцій від 1 мМ до 3 мМ з інтервалом 0,5 мМ для визначення оптимального Mg2+ концентрація для кожного шаблону та праймера.

    A-4 Температура відпалу

    ■ Висока температура відпалу впливає на зв'язування ґрунтовки та шаблону. —— Зменшіть температуру відпалу та оптимізуйте стан з градієнтом 2 ° C.

    А-5 Час продовження

    ■ Короткий час подовження —— Збільште час подовження.

    З: Хибнопозитивний

    Явища: Негативні зразки також показують смуги цільової послідовності.

    A-1 Забруднення ПЛР

    ■ Перехресне забруднення послідовності мішеней або продуктів ампліфікації —— Обережно, щоб не пропустити піпеткою зразок, що містить послідовність мішені, у негативній пробі або вилити їх з пробірки для центрифуги. Реактиви або обладнання слід автоклавувати для усунення наявних нуклеїнових кислот, а наявність забруднення слід визначити шляхом експериментів з негативним контролем.

    ■ Забруднення реагентів —— Розподіліть реактиви рівною мірою та зберігайте при низькій температурі.

    А-2 Праймr

    ■ Mg2+ концентрація занадто низька —— Правильно збільшити Mg2+ концентрація: Оптимізуйте Mg2+ концентрації шляхом серії реакцій від 1 мМ до 3 мМ з інтервалом 0,5 мМ для визначення оптимального Mg2+ концентрація для кожного шаблону та праймера.

    ■ Неправильний дизайн праймера, а цільова послідовність має гомологію з нецільовою послідовністю. —— Грунтовки для повторного проектування.

    З: Неспецифічне посилення

    Явища: смуги ампліфікації ПЛР не відповідають очікуваному розміру, або великі, або малі, або іноді зустрічаються як специфічні смуги ампліфікації, так і неспецифічні смуги ампліфікації.

    Буквар А-1

    ■ Погана специфічність ґрунтовки

    —— Грунтовка для повторного дизайну.

    ■ Концентрація ґрунтовки занадто висока —— Правильно збільшуйте температуру денатурації та подовжуйте час денатурації.

    А-2 мг2+ концентрація

    ■ Mg2+ концентрація надто висока —— Правильно зменшіть концентрацію Mg2+: Оптимізуйте Mg2+ концентрації шляхом серії реакцій від 1 мМ до 3 мМ з інтервалом 0,5 мМ для визначення оптимального Mg2+ концентрація для кожного шаблону та праймера.

    А-3 Термостабільна полімераза

    ■ Надмірна кількість ферменту - відповідно зменшуйте кількість ферменту з інтервалом 0,5 ОД.

    A-4 Температура відпалу

    ■ Температура відпалу занадто низька —— Відповідно збільште температуру відпалу або застосуйте двоступеневий метод відпалу

    А-5 ПЛР цикли

    ■ Занадто багато циклів ПЛР —— Зменшіть кількість циклів ПЛР.

    З: Плямисті або розмазані смуги

    Буквар А-1—— Погана специфічність —— Переробити грунтовку заново, змінити положення та довжину ґрунтовки, щоб підвищити її специфічність; або виконати вкладену ПЛР.

    А-2 шаблонна ДНК

    —— Шаблон не чистий —— Очистіть шаблон або витягніть ДНК наборами для очищення.

    А-3 мг2+ концентрація

    ——Мг2+ концентрація занадто висока - належним чином зменшіть Mg2+ концентрація: Оптимізуйте Mg2+ концентрації шляхом серії реакцій від 1 мМ до 3 мМ з інтервалом 0,5 мМ для визначення оптимального Mg2+ концентрація для кожного шаблону та праймера.

    A-4 dNTP

    —— Концентрація dNTP занадто висока —— Відповідно зменшіть концентрацію dNTP

    А-5 Температура відпалу

    —— Занадто низька температура відпалу —— Відповідно збільште температуру відпалу

    Цикли А-6

    —— Занадто багато циклів ——Оптимізуйте номер циклу

    З: Скільки матричної ДНК слід додати в реакційну систему ПЛР 50 мкл?
    ytry
    З: Як підсилити довгі фрагменти?

    Перший крок - вибір відповідної полімерази. Звичайна Taq-полімераза не може коректуватися через відсутність 3'-5 'екзонуклеазної активності, а невідповідність значно знизить ефективність розширення фрагментів. Тому звичайна Taq -полімераза не може ефективно ампліфікувати фрагменти -мішені розміром більше 5 кб. Для поліпшення ефективності розширення та задоволення потреб ампліфікації з довгими фрагментами слід вибрати полімеразу Taq зі спеціальною модифікацією або іншу високоточну полімеразу. Крім того, ампліфікація довгих фрагментів також вимагає відповідного коригування дизайну грунтовки, часу денатурації, часу розширення, рН буфера тощо. Зазвичай праймери з 18-24 п.н. можуть призвести до кращого врожаю. Щоб запобігти пошкодженню шаблону, час денатурації при 94 ° C слід скоротити до 30 секунд або менше за цикл, а час підвищення температури до 94 ° C перед ампліфікацією - менше 1 хвилини. Крім того, встановлення температури розширення приблизно на 68 ° C та розрахунок часу розширення відповідно до швидкості 1 кб/хв може забезпечити ефективне ампліфікацію довгих фрагментів.

    З: Як покращити вірність ампліфікації ПЛР?

    Частоту помилок ампліфікації ПЛР можна зменшити, використовуючи різні ДНК -полімерази з високою точністю. Серед усіх виявлених на сьогодні ДНК -полімераз Taq фермент Pfu має найнижчу частоту помилок і найвищу точність (див. Додану таблицю). На додаток до відбору ферментів, дослідники можуть додатково зменшити швидкість мутації ПЛР шляхом оптимізації умов реакції, включаючи оптимізацію складу буфера, концентрацію термостабільної полімерази та оптимізацію числа циклів ПЛР.

    Напишіть своє повідомлення тут і надішліть його нам